碧波蕩漾的意思是什么 怎么理解碧波蕩漾的意思
2023-01-30
瓊脂糖凝膠電泳的原理 瓊脂糖凝膠電泳的原理和方法
更新時間：2022-03-11 22:03:28作者：佚名
不同大小的DNA片段，在堿性條件下帶負(fù)電荷，在電流的作用下，由負(fù)極向正極移動，根據(jù)不同DNA分子片段的大小和形狀不同，其在電場中泳動的速率也不同，于是在相同時間的情況下，經(jīng)過紫外照射，就可以看到DNA的位置，從而達(dá)到分離、鑒定的目的。
瓊脂糖凝膠電泳步驟：1、用蒸餾水將制膠工具洗干凈，準(zhǔn)備好制膠平板，用瓊脂將模具邊緣封閉，架好梳子；2、根據(jù)要分離的樣品（DNA）大小配制合適濃度的瓊脂糖凝膠。準(zhǔn)確的稱取一定量的瓊脂糖干粉，加入到合適體積的錐形瓶中，加入一定量的電泳緩沖液（30ml左右TAE）；放入到微波爐內(nèi)加熱融化，冷卻片刻（不燙手即可）。
3、融化后的瓊脂溶液搖晃混勻，倒入電泳槽中，等其凝固；4、室溫下凝固30-40min左右，小心的拔出梳子，取出凝固好的凝膠放入電泳槽內(nèi)，準(zhǔn)備上樣；5、在電泳槽中倒入電泳緩沖液（TAE）；沒過膠面1mm左右，去除膠孔內(nèi)的氣泡。
6、上樣，5ulDNA樣品加入1ul上樣緩沖液（loading buffer）和1ul的染料，用搶混勻后加入到凝膠孔內(nèi)；7、上樣結(jié)束，接通電源，紅色正極，黑色負(fù)極，DNA樣品有負(fù)極往正極運(yùn)動，加樣孔側(cè)為負(fù)40-50v電壓，電壓30敏左右即可（<40min）；8、電壓結(jié)束，關(guān)閉電源，凝膠成像儀上觀察電壓位置并比對marker判斷大小。